微生物菌群的分离纯化和培养鉴定详细说明

    随着人们生活水平的不断提高，食品、医药、饮用品、化妆品等行业均需要微生物检测。在微生物检测中，需要了解微生物菌群的分离纯化、培养、鉴定及保藏。

一、微生物纯培养分离技术

获得纯培养物对微生物学研究至关重要，纯培养物是指来源于同一单细胞的细胞群体。

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的纯洁，防止其他微生物的混入。

1、平板涂布法

因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途：一般多用于从菌种的纯化；

优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；

缺点：不能计数。

2、平板划线法

最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

用途：一般多用于筛选菌株。一般用于平板培养基的回收率计数。 

优点：可以计数，可以观察菌落特征。 

缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的话，长不出单菌落。

二、大肠菌种的培养鉴定

大肠菌群能在乳糖胆盐液体培养液中生长，并且产气产酸，使培养液变色。还能在伊红美兰固体培养上生长，形成黑紫色的菌落，有的还有金属光泽。其他病原菌的菌落呈粉红色。再做镜检观察是无芽孢的革兰氏阴性杆菌（呈红色）。即可鉴定是有大肠菌群的菌存在。

三、菌种保藏

菌种保藏是将微生物的菌种经长时间的保存，不污染其它杂菌，及可保持其形态特征和生理性状，减少变异，防止衰老，以便于将来使用。保藏菌种一般是选用它的休眠休，如孢子；芽孢等等，并且要创造一个低温；干燥；缺氧；避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体能长期地处于休眠状态。对于不产孢子的微生物，应使其新陈代谢处于最低状态，又不会死亡，从而达到长期保存的目的。

（内容来源实验与分析）