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液相色谱仪流动相的配制与使用

点击: 次 时间:2022-04-20 14:47

液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。对高沸点、难气化化合物的混合物通过色谱柱和淋洗剂实现分离。由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、分离效率高、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析、石油化工等各种领域。

液相色谱仪流动相的配制与使用(图1)

LC210液相色谱仪

1、恒度洗脱

  一定是将水相与有机相混合后、抽滤(使用混合型过滤膜),用一个管路(如A管)泵入仪器,这是使用的原则。切勿因节约有机相、便于摸索色谱条件等原因而使用两个管路(一个纯水相、一个纯有机相)泵入仪器,即便配制了脱气机,因为这样极易造成水相中盐和表面活性剂的少量析出。

  剩余流动相完全可继续使用,密封后放置阴凉处,待下次试验时与新配制的流动相混合后抽滤即可。无需担心发霉、无机盐析出、挥发、比例不准等问题。

2、梯度洗脱

  流动相配制最为科学的方式是:A相为高比例的水相-低比例的有机相、B相为低比例的水相-高比例的有机相。其次为:A相为高比例的水相-低比例的有机相、B相为纯有机相。最不科学的为:A相为纯水相、B相为纯有机相,如既有质量标准采用了此种方式,建议改为第二种或第一种方式,否则基线漂移严重,难以进行稳定的杂质检测。

梯度洗脱结束后,建议经5分钟回到初始状态,再平衡5分钟后开始下一针测定。注意这10分钟的稳定极为关键。切勿短时间内回到初始状态,会对仪器和色谱柱损伤较大。

3、水相中的溶质溶解方式

  水相中需溶解的无机盐和表面活性剂等固体溶质,建议采用加热法,不建议采用振摇、超声等方式。不当方式的溶解,溶质可能处于“临界胶团浓度”,其后一旦遇到某特殊情形(如遇有机溶剂、温度剧降等),极易析出少量结晶。而一旦析出,便将损伤仪器和色谱柱,呈现泵头处析出“盐和白粉”的现象。

4、注意事项

如需使用正相系统,一定要单独采用一台仪器(如二手的或较为破旧的),切勿采用异丙醇转换,此举对仪器损伤极大。

正相所使用的流动相(如正己烷、环己烷等),无需抽滤,混匀超声后即可使用。




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