使用荧光分光光度计标准曲线法对样品定量的步骤

以棱光F95S荧光分光光度计为例，说明使用标准曲线法对样品定量的具体步骤。

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1、按下仪器总电源开关。

2、主机预热 30 分钟。

3、准备样品

荧光样品池一盛蒸馏水或去离子水作参比（或试剂空白、参比溶液）。再取已知含量的标准样品，按规范流程配置系列标准溶液，如按浓度从低到高标 A、B、C、D等。然后把这些配置好的标准溶液中浓度最高的标准溶液注入样品池二中。

4、旋转“波长”调节旋钮，至标准样品荧光发射光谱峰值波长处。

5、按“模式”选择键，进入主菜单界面，选择执行“荧光值”测定功能。

6、灵敏度设定

打开样品室盖，样品池二置入样品座上，合上样品室盖。然后按“归一”调整键，调节至LCD液晶显示窗显示荧光值显示在 10-100 左右之间，记下此时的灵敏度档位。

7、调零

打开样品室盖，样品池一置入样品座上，合上样品室盖。然后按“调零”调整键，仪器自动调整0%，至LCD液晶显示窗显示0.0±0.1%止。如发现0%有漂移，继续按下调零调整键，直至LCD液晶显示窗显示 0.0±0.1%为止。

8、放入标准样品

打开样品室盖，取出样品池一，然后倒掉样品池二中的溶液，清洗干净后注入配置好的标准样品A，然后将样品池二置入样品室内的样品座，合上样品室盖。

9、读数

等数值稳定下来之后显示的数值就是该待测样品的荧光值，由LCD液晶显示窗读出仪器测得的样品荧光值，并记录。

10、重复执行上述8、9步骤，逐个记录B、C、D等每个标样的荧光值。

11、取待测样品

取待测浓度样品，经稀释摇匀，注入用蒸馏水或去离子水洗涤后的荧光样品池二。

12、放入待测样品并读数

打开样品室盖，将装有待测样品样品池二置入样品座上，合上样品室盖。待LCD液晶显示窗显示的数值稳定下来之后读出仪器测得的待测样品荧光值，并做记录。

13、制作标准曲线

取坐标纸，以 X 轴为浓度坐标(范围：0～试样最大浓度值)，以 Y 轴为荧光值坐标(范围：0～测量的最大荧光值)。按测量误差要求取轴上的值。在图上找出各个对应标准溶液浓度和相应荧光值的坐标点，并用一直线通过四个坐标点，或使坐标点均匀分布在直线两边，并使点到直线间的距离最小。

建议进行本操作时购买棱光通用数据处理软件包，可自动绘制标准曲线，方便对数据进行计算、操作，同时也节省操作时间。

14、获取待测样品的浓度

由标准曲线表Y轴荧光值坐标定位待测样品浓度值位置，获得标准曲线表X轴浓度坐标相应点的浓度值。

15、继续测定其它样品，或关闭仪器总电源开关。