液相色谱仪色谱柱如何安装和清洗

一、液相色谱仪色谱柱的安装

标准操作规程(SOP)应为：取A管路放入流动相瓶中→ 拧松泵头 → 流速由0ml/min逐渐升至10ml/min，观察尾液是否呈瀑布状流出(持续10秒) → 拧紧泵头 → 流动相呈抛射状从安装色谱柱的一端喷出(观测是否呈抛物线状，持续5秒) → 流速逐步降至1.0ml/min →安装色谱柱，待20秒后，流动相从色谱柱另一端呈泉水状涌出再安装另一端→ 手握两端螺丝帽，拧紧。

以上安装顺序遵循的是：逐级排放气泡和仪器内存留的洗液。

二、试验后色谱柱的清洗

1、C8柱、C18柱的清洗

液相色谱仪最为常用的C8柱、C18柱。

当流动相仅为乙腈-水或甲醇-水时，流速1.0ml/min冲洗30min，，柱温保持实验时的温度。

水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、高氯酸等物质时，先采用纯水(或含有2%甲醇)，冲洗A管路(实验中采用的管路)，时间30min(如流动相中有表面活性剂，则适当增加时间)，流速1.0ml/min，柱温可较实验温度高出5~10℃。随后更换成20%甲醇再冲洗30min，流速不变，柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。

实践证明没必要采用高比例的甲醇冲洗，因为残余有机相中的水相遇到高比例甲醇后在泵头上、色谱柱中会析出少量盐和表面活性剂，导致色谱柱寿命缩短。

2、其他类型的色谱柱

    对于不经常使用的色谱柱类型，最好先查询使用、清洗、保存的方法，不能凭感觉操作，否则易造成色谱柱性能急剧下降的后果。

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