常见的三种高效液相色谱法介绍

一、液固吸附色谱法（LSC）      

 流动相为液体，固定相为固体吸附剂。

1、分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力差异； 

分离前提：K不等或k不等；

2、固定相：与LC比，固定相粒径不同（<10μm）； 

3、流动相：底剂（烷烃）+有机极性调节剂。

4．影响K的因素：

与固定相性质和流动相性质有关；

溶质分子极性↑，洗脱能力↓，k↑，tR↑；

溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，k↓，tR↓；

注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间；

5、出柱顺序：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱；

6、硅胶吸水量↑，LSC→LLC

硅胶含水量较小，吸附色谱，硅胶极性较大；

硅胶含水量>17% ，分配色谱，硅胶失活→载体；

吸附的水→固定液

二、液-液分配色谱法（LLC）

1、分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异

2、固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）

缺点：

系统内部压力大，易流失，不实用

固定液-极性→NLLC

固定液-非极性→RLLC

3、①正相色谱-固定液极性>流动相极性（NLLC）

极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱：适于分离极性组分；

②反相色谱-固定液极性<流动相极性（RLLC）

极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱：适于分离非极性组分；

三、化学键合相色谱法（BPC）

1、化学键合相 

（1）分离机制：分配+吸附（以LLC为基础）；

（2）特点：不易流失；热稳定性好；化学性能好；载样量大；适于梯度洗脱；

2、反相键合相色谱

（1）分离机制：疏溶剂理论； 

正相-流动相与溶质排斥力强，作用时间↑，K↑，组分tR↑；

反相-流动相与溶质排斥力弱，作用时间↓，K↓，组分tR↓；

（2）固定相：极性小的烷基键合相；

C8柱，C18柱（ODS柱-HPLC约80%问题）；

（3）流动相：

极性大的甲醇-水或乙腈-水；

流动相极性>固定相极性；

底剂+有机调节剂（极性调节剂）；

例：水+甲醇，乙腈，THF；

（4）流动相极性与k的关系：流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑

（5）出柱顺序：极性大的组分先出柱；极性小的组分后出柱；

（6）适用：非极性~中等极性组分（HPLC 80%问题）

3、正相键合相色谱

(1)分离机制：溶质分子与固定相之间定向作用力、诱导力、或氢键作用力

(2)固定相：极性大的氰基或氨基键合相；

(3)流动相：极性小（同LSC）；底剂+有机极性调节剂； 例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇。

(4)流动相极性与K的关系：流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓；

(5)出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱；

(6)适用：氰基键合相与硅胶的柱选择性相似（极性稍小），分离物质也相似；氨基键合相与硅胶性质差别大，碱性，分析极性大物质、糖类等；

4、离子对色谱和离子抑制色谱

反相离子对色谱法（IPC或PIC） 

反相色谱中，在极性流动相中加入离子对试剂，使被测组分与其中的反离子形成中性离子对，增加K和tR，以改善分离；

(1)离子对试剂：烷基磺酸钠→分析碱，四丁基季胺盐→分析酸

(2)影响K的因素:

a．与m的极性有关（同反相色谱）；

b．与R的链长有关：R↑长，极性↓小，tR↑，k↑；

(3)适用：

较强的有机酸、碱；反相离子抑制色谱；

在反相色谱中，通过加入缓冲溶液调节流动相pH值，抑制；

组分解离，增加其K和tR，以达到改善分离目的；

1）离子抑制剂：弱酸、弱碱性物质； pH一定的缓冲溶液；

2）K的影响因素：与流动相极性有关，还与pH值有关；

选择流动相：应同时考虑极性及pH值； 

酸性物质-加入酸HAc，tR↑，K↑； 

碱性物质-加入碱NH3·H2O，tR↑，K↑；  

调节pH范围：3.0~8.0；pH>8.0破坏键合相与载体的结合；pH<3.0腐蚀柱子；

3）适用：

极弱酸碱物质；pH=3~7弱酸；pH=7~8弱碱；两性化合物。

（内容参考小木虫论坛）